Определение токсигенности дифтерийных бактерии

Определение токсигенности дифтерийных бактерии

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Шаги проведения
ПЦР – это молекулярно – био способ диагностики.
Сущность ПЦР состоит в повторяющемся удвоении определенного участка ДНК при помощи специфичных праймеров (затравок) особенных ферментов – полимераз.
В итоге роста ДНК появляется достаточное ее количество, чтоб можно было выявить физико-химическими способами хроматографией либо электрофорезом.
Праймеры получают из Определение токсигенности дифтерийных бактерии узнаваемых геномов возбудителей.
Неотклонимым условием проведения ПЦР является познание нуклеотидной последовательности объекта исследования (бактерии, вирусов и т.д.)
Исследуемую ДНК собирают в пробирке совместно с необходимыми компонентами и прогревают
При всем этом комлементарные нити ДНК разъединяются. Этот шаг именуется денатурацией ДНК.
К образовавшимся одноцепочечным ДНК присоединяют праймеры. Этот шаг Определение токсигенности дифтерийных бактерии именуется «отжигом» (присоединением)
Фермент полимераза достраивает комплементарные цепи ДНК. Этот шаг именуется «элонгация» (удлинение).
Обычно, проводится 30 циклов, что позволяет получить 2і° копий участка ДНК возбудителя.
ИТОГО:

РИФ ровная

Шаги проведения
При прямом способе готовится продукт, содержащий исследуемые мельчайшие организмы (АГ).
Фиксируют его водянистым фиксатором (ацетоном).
Обрабатывают специфичной люминесцирующей сывороткой (ацетон).
Отмывают излишек Определение токсигенности дифтерийных бактерии сыворотки.
Высушивают продукт и рассматривают в люминесцентном микроскопе.
При положительной реакции наблюдаются свечение антигена.
Это реакция позволяет за 1-2 часа найти микробные антигены.
Способ прост и высокоспецифичен , но просит огромного набора разных люминесцирующих сывороток.
ИТОГО:

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Шаги проведения
Специфицеский антиген адсорбируют в лунках полистиролового планшета Определение токсигенности дифтерийных бактерии.
Инкубируют с испытуемыми сыворотками человека.
Отмывают несвязавшиеся иммуноглобулины.
Связавшиеся иммуноглобулины выявляют при помощи антиглобулиновой сыворотки, к которой прикреплен фермент пероксидаза.
Добавляется субстрат (пероксид водорода) и индикатор (диамин бензидин), которые позволяют оценить ферментативную активность по интенсивности расцветки.
Интенсивнось расцветки можно оценить зрительно либо при помощи спектрофотометра.
Интенсивность расцветки пропорциональна сорбированных на антигене Определение токсигенности дифтерийных бактерии антител.
ИФА позволяет выявить антитела к различным антигенам.
ИТОГО:

Цветная проба для определения типа вируса полиомиелита

Шаги проведения
Цветная реакция базирована на том, что клеток культуры ткани при собственном росте изменяет РН питательной среды за счет выделения либо кислых товаров метаболизма. Это определяется по изменению цвета индикатора фенолового красноватого, входящего в Определение токсигенности дифтерийных бактерии состав среды. В кислой среде феноловый изменяет собственный цвет в желтоватый. При поражении клеток вирусом цвет среды красноватый.
В 3 пробирки заносят по 0,25 мл вируссодержащий материал, по 0,4 мл вазелинового масла, чтоб не было воздуха кислорода, по 0,25 мл типовой сыворотки вируса полиомиелита (1, 2, 3) в надлежащие пробирки. На 1 час оставляют Определение токсигенности дифтерийных бактерии при комнатной температуре.
Через 1 час во все пробирки добавляют по 0,25 мл клеточной суспензии.
Учет результатов. Через 48-72 час читают итог.

РТГА для определения типа вируса гриппа

Шаги проведения
Реакция применяется для определения типа вируса.
В 5 луночек пластмассового планшета заносят по 0,25 мл вируссодержащий материал, добавляют типовые сыворотки против вируса гриппа – по 0,25 мл. А0; А Определение токсигенности дифтерийных бактерии1; А2; В; С. Потом – по 0,5 мл 1% куриных эритроцитов, планшет оставляют при комнатной температуре на 1 час.
Через 1 часа читают итог реакции.
Вирус гриппа относится к тому типу, с которым образовался осадок в виде «пуговки».
Прокомментируйте приобретенный итог.
ИТОГО:

РГА

Шаги проведения
Агглютинация эритроцитов происходит в присутствии вируса, которые адсорбируются на эритроцитах.
РГА Определение токсигенности дифтерийных бактерии ставят на особых пластмассовых планшетах с лунками.
В луночках готовят разведения вируса от 1:10 до 1:320-я луночка контроль эритроцитов. Во все луночки заносят по 0,5 мл взвеси куриных эритроцитов. Планшет оставляют при комнатной температуре.
Итог реакции читается через 30 мин. В контрольной луночке отмечается осадок эритроцитов в виде «пуговки Определение токсигенности дифтерийных бактерии», в случае положительной реакции на деньке луночек появляется осадок в виде зонта.
Прокомментируйте приобретенный итог
ИТОГО:

Определение токсигенности дифтерийных бактерии

Шаги проведения
Токсигенные бактерии – это те же бактерии, которые выделяют экзотоксин. Для определения токсигенности используют способ диффузии в агар.
На середину с питательным агаром кладут фильтровальную бумагу, заблаговременно смоченную антитоксической противодифтерийной сывороткой.
С Определение токсигенности дифтерийных бактерии 2-х сторон от бумаги делают посев культур, выделенных от нездоровых.
Чашечки помещают в термостат при t0 – 370С на 24 часа.
Через день учитывают результата: полосы преципитации (либо «усики») образуются в местах взаимодействия экзотоксина с антитоксином. Происходит реакция нейтрализации токсина антитоксином.
ИТОГО:

РСК

Шаги проведения
Реакция базирована на взаимодействи Определение токсигенности дифтерийных бактерии иммунной сыворотки со специфичным антигеном, при наличии комплемента. Образующиися комплекс антиген+ антитело связывает комплемент.
В случае отсутствия комплекса антиген+антитело комплемент остается свободным.
Процесс связывания комплемента с комплексом невидимый.
Для того чтоб установить, вышло связывание комплемента либо нет, вводится 2-ая (гемолитическая) система, состоящая из гемолитической сыворотки и эритроцитов барана.
При наличии свободного Определение токсигенности дифтерийных бактерии комплемента наступает гемолиз.
РСК проводится в 2 шага: I-этап. Взаимодействие антигена и антитела, связывания комплемента (в 1-й пробирке), (во 2-й и 3-й пробирках) связывания не происходит т.к. они являются контрольными, в их нет 1-го из ингредиентов (либо антигена, либо антитела). II-этап. Добавление гемолитической системы Определение токсигенности дифтерийных бактерии для определения в каком состоянии находится комплемент (в связанном либо свободном).
В случае хорошего результата на опытнейшей пробирке не произойдет гемолиз ввиду отсутствия свободного комплемента. В контрольных пробирках произойдет гемолиз т.к. в присутствии свободного комплемента гемолитическая сыворотка гемолизирует эритроциты барана.
В случае положительного результата во всех 3-х пробирках Определение токсигенности дифтерийных бактерии – гемолиз.
Прокомментируйте приобретенный итог.
ИТОГО:


opredelenie-tipa-otkloneniya-rechevogo-razvitiya.html
opredelenie-tipa-svoego-teloslozheniya.html
opredelenie-titruemoj-kislotnosti-zerna-muki.html